尊龙凯时的酶联免疫吸附测定（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种用于定性和定量检测可溶性抗原或抗体的免疫反应方法。这种技术利用抗原与抗体之间的特异性结合，将待测样本固定在聚苯等固相载体上。ELISA的主要目的是检测血清、尿液、细胞上清等液体中的特定抗原，以实现准确的定性分析。

ELISA的基本原理是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体的表面，使酶标记的抗原抗体能够在此表面进行反应。检测过程中，研究者通常会设置标准孔、空白孔和样本孔。标准孔中加入100μL倍比稀释的标准品，空白孔中加入100μL标准品及样本稀释液，而其他孔则加入100μL待测样本（建议所有待检样本和标准品都设立复孔；稀释倍数可通过预实验或技术支持进行确认）。

在试验过程中，应将酶标板覆盖，上于37°C下孵育90分钟。注意在加样时尽量不触及孔壁，轻轻混匀以避免气泡，控制加样时间在10分钟内。随后甩去孔内液体，无需洗涤。接着，在每个孔中加入100μL生物素化抗体工作液，再次覆盖酶标板，并于37°C下温育1小时。处理完后，甩去孔液，拍干，并进行3次洗涤。

洗板完成后需立即进行下一步操作，避免微孔板干燥。接下来，在每孔中加入100μL HRP酶结合物工作液，覆盖板并于37°C下温育30分钟，之后甩去孔内液体并洗板5次。再向每个孔加入90μL底物溶液（TMB），并在37°C避光孵育15分钟左右。根据显色情况进行适度调整，但切勿超过30分钟。一旦标准孔出现明显的颜色梯度（前四个显色孔呈现明显蓝色梯度），可以终止反应。

在终止反应前，提前15分钟开启酶标仪进行预热。每孔加入50μL终止液，尽量按照底物溶液的顺序进行添加。最后，使用酶标仪在450nm波长下测量各孔的光密度（OD值）。由于实验操作条件的不同，标准曲线的OD值可能存在差异，以下是我们实验室建立的标准曲线数据供参考：

NE浓度(ng/L)与OD值的关系如下：

200、236、310、015、445、009、482、506、191、250、316、0081。

对于血清、血浆或其他液体样本，100μl可用于检测一个指标。未经分离处理的样本（例如全血1ml）大约可分离出100-200μl血清，须根据客户送样情况而定。全血样本应保持在4℃并及时送检，其他液体样本需于-20℃下冻存送检。对于组织样本，至少需0.1g（相当于黄豆大小），最终能获得约500μl的上清液，可检测5个指标，并同样需在-20℃下冻存送检。

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