在生物医疗研究中，确保最佳病毒剂量以实现靶点单独进入细胞一直是研究者们面临的挑战。不论是在体外细胞实验中使用慢病毒文库，还是在体内进行的AAV文库实验，控制每个细胞只被单个靶点感染至关重要。文库实验旨在揭示由单一基因引起的功能变化，因此需要严格地限制每个细胞只感染一株病毒。

为了优化实验条件，建议首先通过对照病毒进行预实验，寻找最佳的感染效率（MOI），通常设定在80%。在文库操作中，所使用的MOI通常按比例减少为最佳MOI的三分之一，这样可以显著降低每个细胞感染病毒的概率，从而减少重复感染的可能性。然而，这种方法对于难以感染的细胞（如免疫细胞）及体内实验的适用性仍需进一步探讨。因为在这种情况下，最佳MOI的感染效率往往不超过30%，这意味着即便减量为三分之一，几乎无法实现有效感染。

为了解决这一难题，尊龙凯时推出了三色荧光（mTagBFP、Venus、mCherry）病毒产品，旨在帮助研究者更好地开展文库感染的预实验。这种三色荧光病毒既包含慢病毒也包含AAV两种产品类型，极大地丰富了实验选项。相关文献《Transcriptional linkage analysis within vivo AAV-Perturb-seq》提供的实验方法显示，通过对AAV病毒进行低感染複数的体内滴定实验，可以有效测试其在多细胞中的感染能力。

实验中制备了三种不同剂量的AAV（25E9、5E9、5E10颗粒数），采用的血清型为phpb，病毒构建方案是在CBh启动子的调控下独立表达mTagBFP、Venus和mCherry。通过流式细胞术筛选出能够最大化感染单细胞的最佳剂量，最终选择了5E9的剂量，该剂量使得单一AAV感染的细胞数量达到了极大化。

在进一步的三色实验中，将三种病毒等比例混合，注射到不同剂量的LSL-Cas9小鼠体内（低剂量25E9；中剂量50E9；高剂量25E10），并对不同病毒剂量感染的细胞百分比进行了统计分析。从而识别出最佳剂量，使得单病毒感染比例（即单色荧光阳性细胞的数量）达到最高，并确保了感染细胞的数量比例也是最佳的。

无论是细胞实验还是动物实验，三色荧光病毒的引入为相关预实验提供了新思路。研究者可依据尊龙凯时的优质产品进行不同剂量梯度的细胞感染实验或小鼠体内感染，结合流式细胞分析确定最佳实验条件，从而提升实验的有效性和成果的可靠性。

【参考文献】Santinha, AJ, Klingler, E, Kuhn, M et al. Transcription link analysis within vivo AAV-Perturb-seq Nature 622, 367–375 (2023).