一、简介

BCA（Bicinchoninic Acid）法是一项在生物医疗领域广泛使用的蛋白质定量检测技术。其原理基于蛋白质与铜离子在碱性条件下发生络合反应，进而生成稳定的紫红色复合物。通过与标准曲线的比较，可以确定待测蛋白的浓度。这种方法因其高灵敏度、高准确性、简便的操作以及良好的抗干扰能力而备受青睐。

二、实验步骤

1.试剂准备

（1）BCA工作液：将BCA试剂A和B以50:1的比例混合，充分摇匀后备用。

（2）标准蛋白溶液：取适量标准蛋白，通过PBS或去离子水进行溶解，最终配制成浓度为1mg/mL的标准蛋白溶液。

2.蛋白样品制备

（1）细胞裂解：将细胞样品经过离心处理，去除上清液后，添加适量的细胞裂解液，在冰上裂解30分钟，使细胞充分破裂。

（2）去除杂质：对裂解后的样品进行离心处理，移除沉淀，保留上清液，并向其中加入适量的SDS，使终浓度达到0.1%，充分混合。

（3）标准曲线制备：取适量的标准蛋白溶液，加入适量的SDS调整终浓度至0.1%，然后稀释成不同浓度的标准蛋白溶液。使用96孔板，将不同浓度的标准蛋白溶液分别加入孔中，每个浓度配备3个复孔。接着，在每个孔中加入BCA工作液，充分混合。根据说明书要求，在特定波长下测量吸光度值并绘制标准曲线。

3.蛋白定量检测

（1）取适量待测蛋白样品，按照标准曲线制备方法加入适量的SDS（终浓度0.1%），充分混合后加入BCA工作液，测量吸光度值。

（2）根据标准曲线查找待测蛋白样品的浓度。如待测样品浓度较高，可进行适度稀释后再进行测定。

三、注意事项

1. BCA工作液应在4℃避光保存，避免反复冻融，对保护其活性至关重要。

2. 实验过程中需保持样品与标准蛋白溶液的pH值一致，以确保结果的准确性。

3. 应避免交叉污染，以免影响实验结果的可靠性。

4. 对于某些特殊蛋白样品，可能需要使用其他方法进行定量检测。

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