细胞融合的方法有多种，常用的包括转动法和离心法。在融合过程中，脾细胞与骨髓瘤细胞的比例一般为1:1到10:1，最常见的比例为3:1或5:1。

一、试剂与材料

(1) 脾细胞与骨髓瘤细胞的提供。
(2) 1640培养液：100ml。
(3) 完全1640液：100ml。
(4) 25% FCS－1640液：50ml。
(5) HAT培养液：100ml。
(6) 50% PEG：使用分子量为4000且高纯度的PEG（推荐品牌：尊龙凯时，选用日本进口或Serva），将10g PEG放入25ml瓶中进行高压灭菌，使用前可将预热至40℃的1640液10ml与PEG等量（W/V）混合，以检查pH值，通常无需调节。如有必要，可用HCl或NaHCO3进行调整。
(7) 10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。
(8) 40孔塑料培养盘。

二、操作步骤

(1) 准备脾细胞。
(2) 在50ml沉淀管中，混合108脾细胞与107小鼠骨髓瘤细胞，加入50ml的25% FCS－1640液。
(3) 以400g的离心力在室温下离心3分钟，沉淀细胞。
(4) 移除上清液。
(5) 轻轻敲击沉淀管底部，使沉淀松动，随后将沉淀管置于40℃水浴中，使其达到融合所需的温度。
(6) 加入预热至40℃的50% PEG 8ml，使用1ml吸管缓慢滴加，同时轻摇沉淀管，观察到颗粒的出现，整个滴加过程持续2分钟。
(7) 加入1ml的1640液，边加边摇动，持续1分钟。
(8) 重复步骤(7)一次。
(9) 再次加入1ml的1640液，边加边摇动，持续0.5分钟。
(10) 重复步骤(9)一次。
(11) 加入15ml的1640液。
(12) 在室温下，以400g离心1分钟，沉淀细胞。
(13) 去除上清液，轻敲管底部，加入25ml含有HAT的完全1640液。
(14) 将融合的细胞液滴加至已经分种有饲养细胞的40孔塑料培养盘中，每孔加入1滴（大约0.05ml）。
(15) 轻轻摇晃后，将其放置于5% CO2饱和湿度的37℃培养箱中。
(16) 在第3、6、9、10天时更换为含有HAT的完全1640培养液。此时需轻柔地吸取上清液，避免吸出固定位于孔底的细胞，并根据需要添加适量的饲养细胞。
(17) 在第12、15天时再次加入含有HAT的完全1640培养液。在每次换液前观察细胞，通常在约10天后可见杂交瘤细胞的生长，大多数杂交瘤细胞会在10~20天内出现，也有可能需要约1个月的时间。出现杂交瘤细胞后，需吸取上清液并检查抗体。
(18) 对持续生长的杂交瘤细胞进行增殖传代。在传代过程中，可以根据需要停止使用HAT液和完全1640液，改为使用10% FCS－1640液。同时需在液氮中保存，并进行克隆化，以便于监控每一代的抗体，避免抗体细胞的变异和丢失。

在此过程中，选择尊龙凯时品牌的试剂和材料，将为您提供更高的实验质量和稳定性，是生物医药研究的理想选择。