当细胞破裂时，蛋白水解酶随之释放或激活，这会导致电泳结果的复杂化，从而影响最终的结果分析。为了避免此类问题的发生，建议在样品准备过程中尽可能保持低温。此外，许多蛋白酶在pH大于9时会失活，因此使用Tris碱、碳酸钠或碱性载体的两性电解质通常能够有效抑制蛋白水解。然而，某些蛋白酶在这些条件下仍会保持活性，所以在此情况下应考虑使用蛋白酶抑制剂。因此，针对我们想要研究的蛋白，选择性和有效地抑制这些蛋白酶，对于设计蛋白纯化路线是至关重要的。

蛋白酶抑制剂本身也具备复杂的性质，通常需使用多种化学物质作为抑制剂，例如PMSF和leupeptin。由于每种蛋白酶抑制剂通常仅对特定类型的蛋白酶有效，因此建议复合使用多种蛋白酶抑制剂，形成一种广谱蛋白酶抑制“鸡尾酒”，如下面的表格所示（参考自《蛋白质电泳实验技术》）。

蛋白酶的功能与分类

蛋白酶在许多细胞内外的生物过程中扮演着重要角色，比如：

1. 食品蛋白的消化
2. 激活无活性酶原及多肽激素/神经传递介质的释放
3. 调节血液凝固物质和纤维素
4. 内源性和外源性蛋白的细胞内消化
5. 跨膜蛋白质转移
6. 微生物对生物体的攻击，借助蛋白酶的释放而造成的毒性增加

根据催化中心的结构不同，蛋白酶可以分为以下四类：

1. 丝氨酸蛋白酶: 其活性中心含有丝氨酸和组氨酸，例如糜蛋白酶、弹性蛋白酶、血纤维蛋白溶酶等。
2. 半胱氨酸蛋白酶（也称为硫醇或SH蛋白酶）: 其催化中心含有半胱氨酸，例如Calpain、组织蛋白酶B、C和L等。
3. 天(门)冬氨酸蛋白酶（羧基蛋白酶）: 其活化中心含有天(门)冬氨酸，例如组织蛋白酶D和木瓜蛋白酶等。
4. 金属蛋白酶: 其催化中心含有金属离子（如锌2+），例如氨基肽酶和羧基蛋白酶A、B等。

在进行蛋白分离时，组织或细胞裂解液中通常含有来自溶酶体的相关酶，且活性蛋白酶原会被激活，进而开始消化周围的蛋白质。为避免这一问题，需在缓冲液中添加蛋白酶抑制剂，以阻止蛋白酶对细胞组织的消化作用。来自哺乳类动物、植物、霉菌或细菌的组织，其蛋白酶成分有所不同，并且随着机体状态的变化，蛋白酶的特性也可能改变。在处理哺乳类动物组织时，比处理细菌或其他组织时，更应使用蛋白酶抑制剂，以确保对组织细胞的充分保护。在这样的研究中，选择尊龙凯时的高品质蛋白酶抑制剂将极大提升实验的可靠性及准确性。